接种是微生物学及食用菌栽培领域的专业术语,指将目标微生物或菌种按无菌操作程序移植至培养基的过程。在食用菌生产中,接种又称“播种”,是菌种扩繁与栽培的核心环节,直接影响菌种成活率及成品质量。其操作需在严格无菌条件下进行,涵盖菌种选择、环境消毒、工具灭菌等步骤。
该技术根据应用场景分为微生物接种与食用菌接种两类。微生物接种侧重菌液在培养基的划线分离,而食用菌接种涉及母种传代、原种扩繁及栽培袋移植等流程。操作规范包括接种箱/室空间消杀、酒精灯火焰灭菌、接种工具冷却处理等。特殊菌种如密环菌、元蘑菌还需适配特定接种参数。安全防护涵盖化学药剂剂量控制、紫外线伤害规避及酒精灯防火措施,确保操作过程安全可控。
- 中文名
- 接种
- 外文名
- inoculation
简介
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微生物学术语:接种 inoculation,按无菌操作技术要求将目的微生物移接到培养基质中的过程。
食用菌栽培学术语:接种 inoculation ,将食、药用菌菌种移植在培养基物中的方法、过程。也叫“播种 spawning ”。
食用菌栽培
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接种是食用菌生产中的关键环节之一,也叫做播种。如果接种技术不过关,即会造成杂菌污染,成活率低而前功尽弃,更谈不上栽培了。无论是菌种分离、传代还是扩繁,都要在无菌条件下严格按照无菌操作规程进行。具体要点如下:
1 人员素质
1.1 接种人员要具备认真、细致、自觉、对事业负责的精神。
1.2 接种人员要牢固树立无菌观念,不能存在侥幸心理,切不可麻痹大意。
2 环境消毒
2.1 新制作的或是闲置时间超过15天的接种箱,首次使用前,箱体内、外需用0.1%升汞水或2%来苏儿彻底刷洗消毒。
2.2 闲置超过30天的接种室和缓冲间重新使用前,墙壁需用2%来苏儿喷湿消毒。对新改建或闲置3个月以上没用的接种室,使用前,室内墙壁要用石灰浆粉刷,水泥地面用清水冲刷。
3 空间消毒
将待接种的培养基放入接种箱或接种室后,需对箱或室内进行空间消毒。
3.1 如果是母种传代或接种量少的原种,可利用接种箱同时放入所用的接种工具,然后用化学药物熏蒸或紫外线照射进行空间消毒30分钟。
3.2 如果是量大的原种或三级种生产,培养基放入接种室,同时放入所用的接种工具,再用化学药物熏蒸,同时配合紫外线照射进行空间消毒40分钟左右。
4 携带物消毒
5 杀菌
利用酒精火焰进行必要的杀菌。
5.1 首先将接种工具(钩、铲、刀等)在酒精灯火焰上烧灼后,置于清洁的空试管内冷却备用。
5.2 将试管母种或原种瓶放在万能夹上,旋转式取下棉塞,右手端起酒精灯,让火焰接触管口或瓶口,左手将试管或原种瓶慢慢旋转3~4周,然后将试管或原种瓶固定牢。
6 接种
6.1 用杀菌后的备用接种钩,除去母种斜面的尖端部分以及中央的母种块,随后将接种钩放回母种试管。 左手持预接种的试管培养基,管口稍向下倾斜,用右手小拇指和无名指、食指和中指持接种钩,从母种试管内钩取直径约2mm大小的种块,放入预接种培养基斜面中央,抽出接种钩,放回母种试管,轻燎右手所持棉塞,旋转式塞入接过菌的试管,由右手放到适当位置,连续完成所有预接种试管。
注意:①每次接种时间最长不得连续超过2小时。②操作时,接种工具尖端和种块不能接触到管口和外部其它物体。工具尖端碰到外面物体要重换工具,种块碰到外面物体则作废。③一般用种量:每支试管母种可扩繁一级种100支左右;扩接原种6~8瓶。
6.2 原种接栽培袋的方法
操作规范。一是接种必须3人一班,一人运袋擦袋,一人打眼封口,一人接入菌种。二是接种速度要敏捷,随打眼,随接种,随封口。三是接种时间安排在晚上九点以后或阴天,以免灰尘大增加污染。四是短时间内一次接完,接完后再用气雾消毒剂薰蒸一次。
7 两种特殊接种法
7.1 密环菌传代扩繁时,要趁培养基有凝结水时进行,接人种块直径不能小于0.5mm,同时还要带有菌索。每支试管培养基可同时接入3块母种,每块母种都要用接种工具按压至母种块陷入培养基约2mm,以利菌索尽快伸入培养基;接种原种时,每支试管可接种原种3~4瓶。
7.2 元蘑菌传代扩繁时,种块直径不能小于0.3mm。接种时,将种块从试管培养基尾部约1.5cm处顺斜面中间纵向划线至斜面尖端约2cm处放下种块,此法可使培养周期缩短3天左右。
8 安全
8.1 点燃的酒精灯不能靠近棉塞、塑料等易燃物。
8.2 点燃的酒精灯要放牢,在操作过程中严防将酒精灯碰翻,以免引起火灾。
8.3 接种箱或接种室利用化学药物进行空间消毒时,要计算空间容积,按照用药说明使用,不许任意加大用药量,避免造成药害。
微生物接种
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1.左手持皿用拇指、食指和中指将皿盖揭开约20-30度左右,角度越小遭空气污染的可能性越小,并靠近酒精灯附近操作。
2.右手持接种环,先在酒精灯灭菌,然后取菌液,将沾菌接种环在培养基的边缘划原始线,而后使接种环在指力作用下作轻快的滑移动作,从培养皿的一个边缘滑向另一个边缘,滑动时用力要均匀,切勿将接种环嵌入培养基内。